Kromatografik Ayırma
Kromatografik ayırma, karmaşık doğal ürün karışımlarını tekil bileşiklere ayırmak için kullanılan başlıca aşağı akış tekniğidir. Mobil bir faz tarafından taşınan bir karışım, sabit bir faz üzerinden geçmektedir ve sabit faz ile daha güçlü etkileşime giren bileşenler daha yavaş göç etmektedir, böylece bileşenler uzayda veya zamanda ayrılmaktadır. Basit kolon ve ince tabaka kromatografisinden yüksek performanslı sıvı ve karşı akım varyantlarına kadar, kromatografi doğal ürün izolasyonu ve kalite kontrolünün temel aracı konumundadır.
Tanım
Kromatografik ayırma, bir karışımı, mobil bir fazda çözünmüş halde, sabit bir faz üzerinden geçirerek ayırmaktadır; bileşenler, iki faza karşı farklı afinitelerine göre ayrılmaktadır, bu da onların göreceli göç hızlarını belirlemektedir.
Kapsam
Bu madde, tüm kromatografinin temelini oluşturan diferansiyel dağılım ilkesini, farmakognozide kullanılan başlıca modları ve kromatografinin hem preparatif izolasyonda hem de analitik parmak izi çıkarmada (fingerprinting) oynadığı rolü kapsamaktadır. Bu, metodolojik bir referanstır ve enstrüman protokolleri, dozaj veya terapötik talimatlar sağlamamaktadır.
Temel sorular
- Mobil ve sabit fazlar arasındaki diferansiyel dağılım, bileşenleri nasıl ayırmaktadır?
- Hangi kromatografik modlar, hangi doğal ürün sınıflarına uygundur?
- Preparatif kromatografi (izolasyon için) analitik kromatografiden (parmak izi çıkarmak için) nasıl ayırt edilmektedir?
- Kromatografi, biyoanaliz (bioassay) rehberliğinde bir izolasyon iş akışına nasıl entegre edilmektedir?
Anahtar kavramlar
- Mobil faz ve sabit faz
- Diferansiyel dağılım ve tutulma
- Kolon ve ince tabaka kromatografisi
- Yüksek performanslı sıvı kromatografisi
- Karşı akım kromatografisi
- Preparatif ve analitik kromatografi
- Kromatografik parmak izi çıkarma (fingerprinting)
- Biyoanaliz (bioassay) rehberliğinde izolasyon
Mekanizmalar
Tüm kromatografi, analitlerin hareketli bir mobil faz ile sabit bir sabit faz arasında tekrarlanan dengeye ulaşmasını kullanmaktadır: sabit faza daha güçlü dağılan bir bileşen daha uzun süre tutulmakta ve daha yavaş göç etmektedir, böylece bir karışım ayrılmış bantlara veya piklere yayılmaktadır (Sticher, 2008). Sabit fazın (örneğin normal veya ters faz silika) ve mobil faz bileşiminin ayarlanması, hedeflenen bileşik sınıfı için seçiciliği düzenlemektedir ve modern seçici ve minyatürleştirilmiş teknikler bu ayırma gücünü daha da keskinleştirmektedir (Lefebvre ve diğerleri, 2021). Doğal ürün çalışmalarında kromatografi iki rol üstlenmektedir: saf bileşikleri izole etmek için preparatif ayırma, genellikle biyoanaliz (bioassay) rehberliğinde yapılmakta, böylece aktif fraksiyonlar ardışık kolonlar aracılığıyla takip edilmektedir; ve kimlik ve kalite kontrolü için fenolik asitler gibi bileşenleri parmak izi çıkarmak ve nicelendirmek amacıyla analitik ayırma (Sticher, 2008; Arceusz ve diğerleri, 2013).
Klinik önem
Kromatografi, bitkisel tıbbi ürünlerin ve doğal ürün ilaç adaylarının kimlik ve kalite kontrolünü destekleyen saflaştırılmış referans bileşikleri, standartlaştırılmış parmak izlerini ve içerik analizlerini sağlamaktadır; bu nedenle, kromatografiyi anlamak, bu tür ürünlerin nasıl karakterize edildiğine dair eleştirel bir değerlendirmeyi desteklemektedir. Bu, tanımlayıcı metodolojik bir bağlamdır ve klinik bir rehberlik değildir; kullanım, doz veya endikasyon hakkında herhangi bir tavsiye içermemektedir.
Kanıt ve kılavuzlar
Kromatografik kimlik ve analiz yöntemleri, bitkisel ilaçlar için farmakope monograflarına dahil edilmiştir ve metodolojik literatür, doğal ürünleri izole etmek ve nicelendirmek için kullanılan modları ve son gelişmeleri incelemektedir (Sticher, 2008; Lefebvre ve diğerleri, 2021; Arceusz ve diğerleri, 2013). Bu madde, bu literatürü referans düzeyinde özetlemekte olup, düzenleyici veya klinik bir kılavuz değildir.
Tarihçe
Kromatografi, Mikhail Tswett'in yirminci yüzyılın başlarında bitki pigmentlerini dolu bir kolonda ayırmasıyla ortaya çıkmıştır, adını buradan almaktadır ve kağıt, ince tabaka, gaz ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi aracılığıyla giderek geliştirilmiştir, doğal ürün izolasyonu ve analizi için vazgeçilmez hale gelmiştir (Sticher, 2008).
İlgili konular
Temel eserler
- sticher-2008
- lefebvre-2021
Sıkça sorulan sorular
- Kromatografi neden doğal ürün izolasyonunda merkezi bir rol oynamaktadır?
- Doğal ekstreler karmaşık karışımlardır ve kromatografi, bileşenlerin mobil ve sabit faz arasında nasıl dağıldığına dair küçük farklılıkları kullanarak onları tekil bileşiklere ayırabilmektedir; bu da onu ham ekstrelerden saf bileşiklere ulaşmada ana yol haline getirmektedir.
- Burada preparatif ve analitik kromatografi arasındaki fark nedir?
- Preparatif kromatografi, saf bileşikleri kullanılabilir miktarlarda izole etmek ve geri kazanmak için uygulanırken, analitik kromatografi, kimlik ve kalite kontrol amaçları için bileşenleri tanımlamak, parmak izi çıkarmak ve nicelendirmek amacıyla uygulanmaktadır.