Transwell Deneyi
Transwell Migration and Invasion Assay · Ayrıca şöyle bilinir: Boyden chamber assay, chemotaxis assay, invasion chamber assay
Transwell deneyi (kökenini aldığı Stephen Boyden'ın adıyla Boyden haznesi deneyi olarak da bilinir), hücre göçünü ve invazyonunu kimyasal gradyanlara veya matriks bariyerleri aracılığıyla ölçmek için kullanılan kantitatif bir yöntemdir. Deneyde, tanımlanmış gözenek boyutuna sahip bir membran ek parçası çoklu kuyucuklu bir plaka içinde askıya alınır: hücreler üst hazneye yerleştirilir, alt hazneye bir kemoçekici konulur ve gözeneklerden başarıyla geçen hücreler alt haznede birikir, burada sayılabilir veya görselleştirilebilir. Ek parçanın matriks proteinleriyle (Matrigel, kolajen) kaplandığı varyantlar, invazyon kapasitesinin ölçülmesini sağlar. Transwell deneyi, hücre biyolojisinde hücre motilitesini, tümör metastatik potansiyelini ve büyüme faktörleri ile inhibitör bileşiklerin etkilerini değerlendirmek için altın standart bir yöntemdir.
Tam yöntemi oku
Bu bölümü okumak için ücretsiz hesapla giriş yapın.
Yöntem haritası
İlişkili yöntemlerin komşuluğu — keşfetmek için bir düğüm seçin.
Ne zaman kullanılır
Transwell deneyi, kemoçekicilere yanıt olarak yönlü hücre göçünü ölçmek, kanser hücrelerinin invaziv potansiyelini değerlendirmek ve biyomateryal özütlerinin veya büyüme faktörlerinin hücre motilitesini nasıl etkilediğini değerlendirmek için idealdir. Kemotaktik bir gradyanın önemli olduğu (kemotaksiyi rastgele göçten ayırmak) ve hücre popülasyonlarının uzamsal ayrımının istendiği durumlarda tercih edilir. Ancak, deneyin skarifikasyon deneyine göre daha fazla kurulum ve inkübasyon süresi gerektirmesi, gerçek zamanlı veya kinetik izleme için daha az uygun olması ve yerçekimi altında hücre çökeltmesinden etkilenmesi mümkündür. Deney ayrıca 3B doku mimarisini de yeniden oluşturmaz; karmaşık organotipik modeller için sferoid invazyon deneyleri veya doku ekplant modelleri düşünülebilir.
Güçlü yönler & sınırlılıklar
- Kantitatif ve objektif: otomatik hücre sayımı veya lüminesans okuması operatör yanlılığını en aza indirir.
- Kemotaksisi ölçer: kimyasal gradyan, yönlendirilmiş göçü rastgele motiliteden ayırır.
- Çok yönlü: aynı temel protokol ile tek başına göçü (kaplanmamış ek parçalar) veya invazyonu (matriks kaplı ek parçalar) ölçebilir.
- Yüksek verimli kapasiteli: 96 kuyucuklu format, birden çok bileşiğin veya koşulun paralel olarak taranmasına olanak tanır.
- İyi karakterize edilmiş: kapsamlı literatür ve standartlaştırılmış protokoller, çalışmalar arası karşılaştırmalara olanak tanır.
- Optimizasyon gerektirir: optimum inkübasyon süresi ve hücre yoğunluğu hücre tipine göre değişir; pilot çalışmalar gereklidir.
- 3B göçü yakalamaz: deney, 2B'deki tanımlanmış gözeneklerden geçişi ölçer, karmaşık 3B ekstraselüler matriks boyunca değil.
- Emek yoğun: manuel boyama ve sayım, çok sayıda örnek için sıkıcı olabilir; otomatik görüntüleme sistemleri iyileştirir ancak maliyet ekler.
- İşlem sırasında hücre kaybı: sabitleme, boyama ve yıkama, zayıf yapışmış hücreleri ayırabilir ve göçün az tahmin edilmesine yol açabilir.
SSS
Hücre tipim için optimum inkübasyon süresi nedir?
İnkübasyon süresi hücre tipine göre değişir: yüksek hareketli kanser hücreleri 4–8 saat gerektirebilirken, daha yavaş fibroblastlar veya epitel hücreleri 12–24 saat gerektirebilir. 4, 8, 12 ve 24 saatte ek parçaları toplayarak bir kinetik çalışma yapın; doğrusal fazı belirlemek ve orta fazda bir zaman noktası seçmek için hücre sayımını zamana karşı çizin.
Üst hazneye serum eklemeli miyim, yoksa serumsuz mu tutmalıyım?
Bir gradyana kemotaksiyi ölçmek için, üst hazneye serumsuz ortam ve alt hazne ortamına serum içeren ortam (veya büyüme faktörü) kullanın. Bu, göçü yönlendiren bir gradyan oluşturur. Her ikisine de serum kullanırsanız, yönlülüğü kaybedersiniz. Bazı uygulamalar, kemokinez (rastgele göç) ile kemotaksiyi ayrı ayrı ölçmek için kasıtlı olarak her ikisine de serum kullanır.
Sabitleme ve boyama sırasında hücre kaybını nasıl en aza indirebilirim?
Nazikçe elleçleyin ve mümkünse sert sabitleyicilerden kaçının. 10 dakika boyunca %4 paraformaldehit ile sabitlemeyi düşünün, ardından boyayın. Alternatif olarak, sabitleme gerektirmeyen ve daha fazla hücre koruyan canlı hücre boyaları (Calcein-AM, DAPI) kullanın. Kristal viyole kullanıyorsanız, dikkatlice uygulayın ve sert yıkamadan kaçının.
Bir deneyden sonra Transwell ek parçalarını tekrar kullanabilir miyim?
Kalıntı hücreler, matriks veya boyanın bir sonraki deneyi kirletmesi nedeniyle ek parçaların yeniden kullanılması önerilmez. Çoğu protokol tek kullanımlık ek parçalar kullanır. Maliyet bir endişe ise, ek başına yeterli tekrara sahip parti deneyleri yaparak tek kullanımlık kullanmayı haklı çıkarın.
İnvazyon deneyleri için ne konsantrasyonda Matrigel kullanmalıyım?
Çoğu protokol, serumsuz ortamda seyreltilmiş 200–300 µg/mL Matrigel (veya ek başına 50–100 µL stok 2 mg/mL matriks çözeltisi) kullanır. Kaplanma konsantrasyonunu hücre tipiniz için optimize edin: çok fazla matriks göçü tamamen engellerken, çok azı yetersiz direnç sağlar. Bir pilot çalışmada 100, 200 ve 400 µg/mL konsantrasyonlarını test edin.
Kaynaklar
- Boyden, S. (1962). The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes. Journal of Experimental Medicine, 115(3), 453-466. DOI: 10.1084/jem.115.3.453 ↗
- Albini, A., Iwama, Y., Odaka, C., & Bomstein, P. (1987). Exogenous ATIII inhibits basic fibroblast growth factor-induced angiogenesis in vitro. Proceedings of the National Academy of Sciences, 84(17), 6142-6146. link ↗
- Kramer, N., Walzl, A., Unger, C., et al. (2013). In vitro cell migration and invasion assays. Mutation Research/Reviews in Mutation Research, 752(2), 142-195. DOI: 10.1016/j.mrrev.2012.08.001 ↗
Bu sayfayı kaynak gösterin
ScholarGate. (2026, June 3). Transwell Migration and Invasion Assay. ScholarGate. https://scholargate.app/tr/biomaterials/transwell-assay
Hangi yöntem?
Bu yöntemi en yakın akrabalarının yanına koyup yan yana okuyun — kütüphane kitapları masaya serer; seçim sizindir.
- Canlı/Ölü TahliliBiyomalzemeler↔ karşılaştır
- MTT/MTS DeneyiBiyomalzemeler↔ karşılaştır
- Çizik Yara TestiBiyomalzemeler↔ karşılaştır