検体固定と染色

固定と染色は、塗抹された細胞診検体を解釈可能なスライドに変える2つの化学的ステップである。固定は細胞を安定させ、その内部構造を保存する。その後、染色は細胞病理学者が核と細胞質を区別し、クロマチン詳細を読み取ることができるように色とコントラストを与える。固定方法と染色の組み合わせは、どの細胞学的特徴を強調するかを決定する意図的な選択である。

Definition

検体固定と染色は、細胞形態を保存し（固定）、細胞成分に選択的な色を付与する（染色）準備段階であり、これにより細胞診スライドを顕微鏡下で読み取ることができる。

Scope

この項目では、細胞診検体がどのように、なぜ固定されるのか（湿潤固定と意図的な風乾）、主要な細胞診染色の原理、そして固定と染色の組み合わせが診断上の疑問にどのように適合されるのかを説明する。これは方法論レベルの参照であり、患者固有の指示は含まれない。

Key concepts

• 凝固性アルコール固定と湿潤固定
• 準備状態としての意図的な風乾
• 核染色と細胞質染色
• パパニコロウ染色（透明、多色性）
• 風乾塗抹標本のためのロマノフスキー染色
• 乾燥アーチファクトとその核詳細への影響
• カバーガラス封入、透明化、スライドの永続性

Mechanisms

固定は自己融解を停止させ、細胞タンパク質と核酸を所定の位置に固定する。細胞診において主要な固定液はエタノールまたはアルコールベースのスプレーであり、塗抹標本がまだ湿っている間に適用される（湿潤固定）。これはパパニコロウ染色に必要な微細な核クロマチンを保存する。あるいは、塗抹標本を風乾させることで、細胞を扁平化させ拡大させる状態にし、これはロマノフスキー染色に必要な準備である。染色は、荷電色素の細胞成分への親和性を利用する。塩基性（陽イオン性）色素は酸性核クロマチンに結合し、酸性（陰イオン性）色素は細胞質タンパク質を着色する。パパニコロウ染色は、核ヘマトキシリンと複数の対比染色を組み合わせて、透明で多色性の細胞を与える。ロマノフスキー染色は、アズール色素とエオシン色素を組み合わせ、その相互作用により特徴的な紫色のクロマチンと異染性（metachromatic）の色を生成する（Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006）。

Clinical relevance

固定と染色は、細胞を分類するために使用されるまさにその特徴の視認性を設定するため、細胞診診断と報告とは切り離せない。この項目は、検査室の実践を理解するための背景として、これらの方法とその根拠を説明するものであり、個々の臨床的決定の根拠となるものではない。

Evidence & guidelines

方法論に関する文献は、2つの主要な染色ファミリーの補完的な役割を確立している。すなわち、核およびクロマチン詳細のためのアルコール固定パパニコロウ染色と、細胞質および背景特徴のための風乾ロマノフスキー染色である。Wittekindによる標準化作業は、アズールB-エオシンYの組み合わせを標準的なロマノフスキー・ギムザ染色として定義した（Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014）。参考書は、固定のタイミングと品質が染色結果および乾燥による核の歪みなどのアーチファクトの主要な制御可能な決定要因であることを強調している（Koss & Melamed 2006）。

History

細胞診染色は19世紀の組織化学とロマノフスキーおよびギムザの血液学染色から発展し、その後1940年代にパパニコロウによる湿潤固定塗抹標本用の多色性で透明な染色によって剥離細胞診のために変革された。20世紀後半のWittekindの色素標準化研究を含む研究は、ロマノフスキー染色を研究室間で再現可能にすることを目指した（Papanicolaou 1942; Wittekind 1982）。

Key figures

• George Papanicolaou
• Dietrich Wittekind

Seminal works

• papanicolaou-1942
• wittekind-1982
• koss-melamed-2006

Frequently asked questions

なぜ一部の細胞診塗抹標本はまだ湿っている間に固定されなければならないのですか？

湿潤（アルコール）固定は、パパニコロウ染色が依存する微細な核クロマチン詳細を保存します。そのような塗抹標本が固定前に乾燥すると、乾燥アーチファクトが核を歪ませ、解釈を損ないます。

細胞診検体がどの染色を受けるかは何によって決まりますか？

それは固定状態と診断上の疑問によって決まります。湿潤固定された塗抹標本は核詳細のためにパパニコロウ染色を受け、意図的に風乾された塗抹標本は細胞質および背景の特徴を強調するロマノフスキー染色を受けます。