Métodos de Identificación Bacteriana

Los métodos de identificación bacteriana determinan la especie (y a veces la cepa) de un organismo recuperado en el laboratorio. Estos métodos abarcan desde la microscopía clásica y las pruebas bioquímicas hasta la perfilación proteómica basada en espectrometría de masas, y el método seleccionado influye en la rapidez y precisión con la que se puede nombrar un patógeno.

Definition

Los métodos de identificación bacteriana son las técnicas de laboratorio utilizadas para asignar un aislado recuperado a un taxón, empleando características fenotípicas, reacciones bioquímicas, perfiles proteómicos o dianas moleculares.

Scope

El tema abarca enfoques fenotípicos como la tinción de Gram, la morfología de las colonias y las reacciones bioquímicas; sistemas de identificación automatizados; y la espectrometría de masas de tiempo de vuelo con desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI-TOF). Se señala como relacionado el tipado a nivel de cepa para fines epidemiológicos. Esta entrada es metodológica y no proporciona instrucciones clínicas para pacientes individuales.

Core questions

• ¿Cómo identifican las bacterias los métodos fenotípicos clásicos?
• ¿Cómo identifica organismos la espectrometría de masas MALDI-TOF y cuáles son sus límites?
• ¿Cuándo se utilizan dianas moleculares en lugar de, o junto con, los métodos fenotípicos?

Key concepts

• Tinción de Gram y microscopía
• Morfología de las colonias
• Perfilación bioquímica y metabólica
• Sistemas de identificación automatizados
• Espectrometría de masas MALDI-TOF
• Bases de datos de espectros de proteínas
• Tipado de cepas

Mechanisms

La identificación fenotípica interpreta propiedades observables: la reacción a la tinción de Gram y la morfología microscópica reducen las posibilidades, la apariencia de las colonias añade pistas, y los paneles de reacciones bioquímicas distinguen especies por sus capacidades metabólicas, a menudo automatizadas para un alto rendimiento. La espectrometría de masas MALDI-TOF, en cambio, genera un espectro de masas de proteínas, esencialmente una huella dactilar proteómica, a partir de una colonia y lo compara con una base de datos de referencia, proporcionando una identificación a nivel de especie en cuestión de minutos una vez que el aislado está disponible; su adopción acortó sustancialmente los tiempos de identificación en laboratorios de rutina (Seng 2009; Clark 2013). Cuando el fenotipo o los espectros son ambiguos, las dianas moleculares pueden resolver la identidad. Cada método presenta limitaciones, incluyendo la cobertura de la base de datos y la incapacidad de distinguir ciertas especies estrechamente relacionadas (Clark 2013).

Clinical relevance

Una identificación más rápida y precisa informa sobre cómo se atribuyen las infecciones a los organismos y cómo se lleva a cabo la vigilancia. Conocer los límites de un método explica por qué algunas especies estrechamente relacionadas se informan solo a nivel de grupo, o por qué un organismo inusual puede requerir pruebas confirmatorias. El tema describe cómo se generan los resultados de laboratorio y no constituye una base para decisiones diagnósticas o de tratamiento individuales.

Evidence & guidelines

Estudios comparativos y revisiones documentan la precisión y las ventajas en el tiempo de respuesta de la espectrometría de masas MALDI-TOF para la identificación bacteriana rutinaria y sus limitaciones (Seng 2009; Clark 2013), mientras que los textos estándar describen los esquemas de identificación fenotípica y bioquímica (Jorgensen 2015).

History

La identificación se basó durante mucho tiempo en tinciones, microscopía y paneles bioquímicos desarrollados a lo largo del siglo XX. La introducción clínica de la espectrometría de masas MALDI-TOF alrededor de 2009 marcó un cambio hacia la identificación proteómica rápida en laboratorios de rutina, complementando los métodos moleculares (Seng 2009; Clark 2013).

Seminal works

• seng-2009
• clark-2013

Frequently asked questions

¿Cómo identifica bacterias la espectrometría de masas MALDI-TOF?

Produce un espectro de masas de proteínas característico a partir de una colonia bacteriana y lo compara con una base de datos de referencia, lo que permite una identificación a nivel de especie en cuestión de minutos una vez que el aislado está disponible.

¿Todavía se utilizan las pruebas bioquímicas?

Sí; los métodos fenotípicos y bioquímicos siguen siendo útiles, especialmente cuando las bases de datos de espectrometría de masas están incompletas o cuando los organismos deben caracterizarse más allá de la identificación de especies.