Akış Enjeksiyon Analizi

Yığın analiz tipik olarak numune başına 10–30 dakika sürer, pipetleme ve karıştırma için insan emeği içerir ve büyük miktarda reaktif tüketir. FIA, tam otomatik operasyonla saniyeler içinde bir numuneyi analiz eder ve sadece mikrolitre reaktif tüketir. Bu, analiz başına maliyeti düşürür, verimi artırır ve operatörler arası değişkenliği ortadan kaldırır. Dezavantajı, FIA'nın her belirli analit için optimize edilmesi gerektiğidir.

FIA, bilinmeyen numunelerin tepe alanını veya yüksekliğini, bilinen standartlar kullanılarak oluşturulan bir kalibrasyon eğrisiyle karşılaştırarak miktar belirler; hepsi aynı koşullar altında (aynı akış hızları, enjeksiyon hacmi, tüp geometrisi, sıcaklık) analiz edilir. Tüm enjeksiyonlar aynı şekilde işlem gördüğü için, reaksiyon tamamlanmamış olsa bile sinyal, analit konsantrasyonuyla tekrarlanabilir şekilde orantılıdır. Bu, her numunenin sistemde aynı süreyi geçirmesi ve aynı derecede reaksiyon dönüşümü sağlaması nedeniyle mümkündür.

Kalıntı, önceki numuneden sonra tüpte ve dedektörde kalan artık analit veya reaktiften kaynaklanır ve bu da sonraki enjeksiyonu kirletir. En aza indirme stratejileri arasında enjeksiyonlar arasında yıkama hacmini artırmak (taşıyıcı çözelti veya durulama çözeltisi kullanarak), yıkama süresini uzatmak, daha küçük çaplı tüpler kullanmak (daha az hacim) ve minimum ölü hacme sahip enjeksiyon valfi tasarımları seçmek yer alır. Doğrulama çalışmaları (yüksek konsantrasyonlu numunelerden sonra blankların analizi), kalıntının ihmal edilebilir olduğunu doğrular.

Tepe sinyali şunlara bağlıdır: (1) reaktif konsantrasyonu—daha hızlı veya daha eksiksiz reaksiyon için artırın; (2) akış hızı—daha yavaş akış daha uzun reaksiyon süresi sağlar; (3) karıştırma bobini uzunluğu—daha uzun bobinler karıştırma ve reaksiyon süresini artırır; (4) enjeksiyon hacmi—daha büyük enjeksiyonlar tepe yüksekliğini artırır (ancak bazal çizgiyi etkileyebilir). Optimizasyon, bu parametreleri sistematik olarak değiştirmeyi ve sinyal-gürültü oranını ve tepe çözünürlüğünü en üst düzeye çıkaran ayarları seçmeyi içerir.

FIA, taşıyıcıyı, reaktifleri ve numuneyi bir manifolda eşzamanlı olarak iletmek için birden fazla peristaltik pompa kullanır ve sürekli bir akış oluşturur. SIA, tek bir pompa kullanır ve tüm sıvıları portlarda saklar, bunları programlanmış diziler halinde tek bir akış hattına çeker. SIA daha fazla esneklik sunar (yöntemleri değiştirmek daha kolay, daha az reaktif hattı), daha da küçük numune/reaktif hacimleri kullanır ve numune başına birden fazla analiz yapabilir. FIA daha basit manifold tasarımı sunar ve tek yüksek hacimli analizler için daha hızlıdır.