Fiksasi dan Pewarnaan Spesimen

Fiksasi dan pewarnaan adalah dua langkah kimia yang mengubah sampel sitologi yang diendapkan menjadi sediaan yang dapat diinterpretasikan. Fiksasi menstabilkan sel dan mempertahankan struktur internalnya; pewarnaan kemudian memberikan warna dan kontras yang memungkinkan sitopatolog membedakan nukleus dari sitoplasma dan membaca detail kromatin. Pasangan metode fiksasi dengan pewarnaan adalah pilihan yang disengaja yang menentukan fitur seluler mana yang ditekankan.

Definition

Fiksasi dan pewarnaan spesimen adalah langkah-langkah persiapan yang mempertahankan morfologi seluler (fiksasi) dan memberikan warna selektif pada komponen seluler (pewarnaan) sehingga sediaan sitologi dapat dibaca di bawah mikroskop.

Scope

Entri ini menjelaskan mengapa dan bagaimana spesimen sitologi difiksasi (fiksasi basah versus pengeringan udara yang disengaja), prinsip-prinsip pewarnaan sitologi utama, dan bagaimana kombinasi fiksasi-pewarnaan disesuaikan dengan pertanyaan diagnostik. Ini adalah referensi tingkat metode dan tidak memberikan instruksi spesifik pasien.

Key concepts

• Fiksasi alkohol koagulan dan fiksasi basah
• Pengeringan udara yang disengaja sebagai kondisi persiapan
• Pewarnaan nukleus versus sitoplasma
• Pewarnaan Papanicolaou (transparan, polikromatik)
• Pewarnaan Romanowsky untuk apusan yang dikeringkan di udara
• Artefak pengeringan dan pengaruhnya terhadap detail nukleus
• Pemasangan kaca penutup, penjernihan, dan keawetan sediaan

Mechanisms

Fiksasi menghentikan autolisis dan mengunci protein seluler serta asam nukleat pada tempatnya. Dalam sitologi, fiksatif dominan adalah etanol atau semprotan berbasis alkohol yang diaplikasikan saat apusan masih basah (fiksasi basah), yang mempertahankan kromatin nukleus halus yang diperlukan untuk pewarnaan Papanicolaou. Sebagai alternatif, apusan dibiarkan mengering di udara, suatu kondisi yang meratakan dan memperbesar sel dan merupakan persiapan yang diperlukan untuk pewarnaan Romanowsky. Pewarnaan kemudian memanfaatkan afinitas zat warna bermuatan untuk komponen seluler: zat warna basa (kationik) mengikat kromatin nukleus yang asam, sementara zat warna asam (anionik) mewarnai protein sitoplasma. Pewarnaan Papanicolaou menggabungkan hematoksilin nukleus dengan beberapa pewarna tandingan untuk menghasilkan sel polikromatik transparan; pewarnaan Romanowsky menggabungkan zat warna azur dan eosin yang interaksinya menghasilkan kromatin ungu karakteristik dan warna metakromatik (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006).

Clinical relevance

Karena fiksasi dan pewarnaan menentukan visibilitas fitur-fitur yang digunakan untuk mengklasifikasikan sel, keduanya tidak dapat dipisahkan dari diagnosis dan pelaporan sitologi. Entri ini menjelaskan metode dan alasannya sebagai latar belakang untuk memahami praktik laboratorium; ini bukan dasar untuk keputusan klinis individual.

Evidence & guidelines

Literatur metodologis menetapkan peran komplementer dari dua keluarga pewarnaan besar - pewarnaan Papanicolaou yang difiksasi alkohol untuk detail nukleus dan kromatin serta pewarnaan Romanowsky yang dikeringkan udara untuk fitur sitoplasma dan latar belakang - dan pekerjaan standardisasi Wittekind mendefinisikan kombinasi azur B-eosin Y sebagai pewarnaan Romanowsky-Giemsa referensi (Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014). Teks referensi menekankan bahwa waktu dan kualitas fiksasi adalah penentu utama yang dapat dikontrol dari hasil pewarnaan dan artefak seperti distorsi nukleus akibat pengeringan (Koss & Melamed 2006).

History

Pewarnaan sitologi berkembang dari histokimia abad kesembilan belas dan pewarnaan hematologi Romanowsky dan Giemsa, kemudian diubah untuk sitologi eksfoliatif oleh pewarnaan polikromatik transparan Papanicolaou untuk apusan yang difiksasi basah pada tahun 1940-an. Pekerjaan akhir abad kedua puluh, termasuk studi standardisasi zat warna Wittekind, berusaha membuat pewarnaan Romanowsky dapat direproduksi di berbagai laboratorium (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982).

Key figures

• George Papanicolaou
• Dietrich Wittekind

Seminal works

• papanicolaou-1942
• wittekind-1982
• koss-melamed-2006

Frequently asked questions

Mengapa beberapa apusan sitologi harus difiksasi saat masih basah?

Fiksasi basah (alkohol) mempertahankan detail kromatin nukleus halus yang menjadi dasar pewarnaan Papanicolaou. Jika apusan tersebut mengering sebelum fiksasi, artefak pengeringan akan mendistorsi nukleus dan menurunkan interpretasi.

Apa yang menentukan pewarnaan yang diterima spesimen sitologi?

Hal ini ditentukan oleh kondisi fiksasi dan pertanyaan diagnostik: apusan yang difiksasi basah menggunakan pewarnaan Papanicolaou untuk detail nukleus, sedangkan apusan yang sengaja dikeringkan di udara menggunakan pewarnaan Romanowsky yang menonjolkan fitur sitoplasma dan latar belakang.