Imunohistokimia dan Metode Deteksi Protein

Imunohistokimia (IHC) melokalisasi dan mengukur protein dalam sediaan jaringan menggunakan antibodi yang digabungkan dengan label yang terlihat, menunjukkan di mana produk gen diekspresikan dan, secara semi-kuantitatif, berapa banyak. Sebagai padanan kuantifikasi transkrip pada tingkat protein, ini adalah alat rutin dalam patologi diagnostik dan molekuler.

Definition

Imunohistokimia adalah metode berbasis jaringan yang menggunakan antibodi berlabel untuk mendeteksi protein spesifik secara in situ, memvisualisasikan lokasi seluler dan subselulernya serta memberikan perkiraan semi-kuantitatif ekspresi protein.

Scope

Topik ini mencakup prinsip deteksi berbasis antibodi, perbedaan antara lokalisasi kualitatif dan penilaian semi-kuantitatif intensitas dan luas pewarnaan, pentingnya standardisasi dan kontrol, serta aplikasi terkenal seperti penilaian reseptor hormon dan HER2 sebagai ilustrasi metode. Ini memperlakukan IHC sebagai metodologi pengukuran dan tidak memberikan ambang diagnostik atau arahan pengobatan.

Core questions

• Bagaimana antibodi berlabel melokalisasi protein dalam sediaan jaringan?
• Bagaimana pewarnaan diubah menjadi skor semi-kuantitatif?
• Mengapa kontrol dan standardisasi penting untuk IHC yang dapat direproduksi?
• Bagaimana deteksi tingkat protein melengkapi kuantifikasi transkrip?

Key concepts

• Pengikatan antibodi-antigen
• Perolehan kembali antigen
• Deteksi kromogenik dan fluoresen
• Penilaian semi-kuantitatif (intensitas dan luas)
• Kontrol positif dan negatif
• Efek fiksasi pra-analitik

Mechanisms

Antibodi primer mengikat antigen targetnya dalam sediaan jaringan yang telah difiksasi; deteksi diperkuat melalui antibodi sekunder dan sistem yang terhubung dengan enzim atau fluorofor yang menghasilkan endapan berwarna atau berpendar pada lokasi antigen. Langkah fiksasi dan perolehan kembali antigen memengaruhi apakah epitop tetap dapat dideteksi, sehingga penanganan pra-analitik sangat memengaruhi hasil. Ekspresi dibaca secara semi-kuantitatif dengan menilai intensitas pewarnaan dan proporsi sel positif, seringkali digabungkan menjadi skor; karena pembacaan ini bergantung pada pengamat dan protokol, kontrol yang divalidasi dan prosedur standar diperlukan untuk reproduktifitas. Pedoman profesional mengilustrasikan bagaimana variabel penilaian dan pra-analitik distandarisasi untuk pengujian reseptor (Hammond et al., 2010; Wolff et al., 2013).

Clinical relevance

IHC sangat penting untuk diagnosis jaringan dan pelaporan biomarker protein, dan memahami sifat semi-kuantitatifnya adalah bagian dari interpretasi laporan patologi. Entri ini menjelaskan metode dan standardisasinya; pedoman yang dikutip dirujuk untuk mengilustrasikan metodologi dan pelaporan, bukan untuk memberikan batas diagnostik atau keputusan pengobatan untuk pasien individu.

Evidence & guidelines

Standardisasi IHC semi-kuantitatif dicontohkan oleh pedoman bersama ASCO/CAP untuk pengujian reseptor estrogen dan progesteron (Hammond et al., 2010) dan untuk pengujian HER2 pada kanker payudara (Wolff et al., 2013), yang mendefinisikan penanganan pra-analitik, penilaian, dan persyaratan kontrol. Ini dikutip di sini sebagai referensi metodologis.

History

Pewarnaan jaringan berbasis antibodi berkembang dari imunofluoresensi pada pertengahan abad kedua puluh, diikuti oleh metode imunoperoksidase yang terhubung dengan enzim yang memungkinkan pewarnaan permanen yang terlihat dengan mikroskop cahaya. Ketika biomarker protein menjadi pusat patologi, perhatian beralih ke standardisasi fiksasi, perolehan kembali antigen, dan penilaian, yang diformalkan dalam pedoman konsensus untuk pengujian reseptor (Hammond et al., 2010; Wolff et al., 2013).

Debates

Seberapa reproduktifkah penilaian IHC semi-kuantitatif?

Karena intensitas dan luas pewarnaan dinilai secara visual dan bergantung pada fiksasi dan protokol, hasilnya dapat bervariasi antara pengamat dan laboratorium; pra-analitik standar, kontrol yang divalidasi, dan kriteria penilaian yang terdefinisi digunakan untuk meningkatkan reproduktifitas.

Key figures

• M. Elizabeth Hammond
• Antonio Wolff
• D. Craig Allred

Seminal works

• hammond-2010
• wolff-2013

Frequently asked questions

Apakah imunohistokimia kuantitatif?

IHC paling baik digambarkan sebagai semi-kuantitatif: ini memperkirakan ekspresi protein dengan menilai intensitas pewarnaan dan proporsi sel positif daripada menghasilkan konsentrasi yang tepat, itulah sebabnya penilaian dan kontrol standar penting.

Mengapa fiksasi jaringan memengaruhi hasil IHC?

Fiksasi dan langkah perolehan kembali antigen selanjutnya dapat menutupi atau mengekspos epitop yang diikat antibodi, sehingga variasi dalam penanganan pra-analitik dapat mengubah pewarnaan dan harus distandarisasi untuk hasil yang andal.