طیفسنجی جذب فرابنفش-مرئی
طیفسنجی جذب فرابنفش-مرئی، تضعیف نور فرابنفش یا مرئی توسط یک نمونه را برای اندازهگیری کمی آنالیتها از طریق گذارهای الکترونیکی اندازهگیری میکند.
Definition
طیفسنجی جذب فرابنفش-مرئی یک روش طیفسنجی مولکولی است که غلظت آنالیت را از کسری از تابش فرابنفش یا مرئی جذب شده در طول گذارهای الکترونیکی تعیین میکند.
Scope
این مبحث ابزار دقیق و روش اندازهگیری جذب مولکولی را در محدوده تقریبی 190 تا 800 نانومتر پوشش میدهد: منابع پیوسته و خطی، تکرنگسازها و آرایههای فتودیود، طیفسنجهای تکبیم و دوبیم، و کاربرد قانون بیر-لامبرت برای تعیین کمی. این شامل روشهای رنگسنجی است که در آن یک واکنش تشکیلدهنده رنگ، یک آنالیت غیرجاذب را قابل اندازهگیری میکند.
Core questions
- جذب چگونه از طریق قانون بیر-لامبرت با غلظت مرتبط است؟
- چه کروموفورها و گذارهای الکترونیکی باعث جذب فرابنفش-مرئی میشوند؟
- چگونه از معرفهای رنگسنجی برای قابل تشخیص کردن آنالیتهای غیرجاذب استفاده میشود؟
- چه منابع خطایی — نور سرگردان، انحراف از قانون بیر، نویز ابزاری — دقت را محدود میکنند؟
Key theories
- قانون بیر-لامبرت
- جذب برابر با حاصلضرب جذب مولی، طول مسیر و غلظت است که امکان اندازهگیری کمی مستقیم را از یک اندازهگیری واحد در برابر کالیبراسیون فراهم میکند؛ این قانون تابش تکرنگ، محلولهای رقیق و عدم وجود انحرافات شیمیایی یا ابزاری را فرض میکند.
Mechanisms
جذب زمانی اتفاق میافتد که یک فوتون، الکترون را از یک اوربیتال مولکولی حالت پایه به یک اوربیتال با انرژی بالاتر ارتقا میدهد؛ شکاف انرژی طول موج جذب شده را تعیین میکند و جذب مولی نشاندهنده احتمال گذار است. یک طیفسنج نسبت شدت عبوری به شدت فرودی را اندازهگیری میکند، آن را به عنوان عبور گزارش میدهد و به صورت لگاریتمی به جذب تبدیل میکند که در محدوده خطی متناسب با غلظت است.
Clinical relevance
طیفسنجی فرابنفش-مرئی اساس آزمایشهای روتین بیشماری است: اندازهگیری کمی پروتئین و اسید نوکلئیک، آزمایشهای شیمی بالینی آنزیمی، اندازهگیری گونههای محلول در تجزیه و تحلیل آب، و آزمایشهای دارویی و انحلال.
History
اساس کمی این روش به کار بوگر و لامبرت در مورد تضعیف نور در قرن هجدهم و اثبات بیر در سال 1852 مبنی بر اینکه جذب با غلظت مقیاس میشود، بازمیگردد. طیفسنجهای فوتوالکتریک عملی در دهه 1940 ظاهر شدند و ابزارهای آرایه دیودی بعداً امکان اکتساب سریع طیف کامل را فراهم کردند.
Key figures
- August Beer
- Pierre Bouguer
- Johann Heinrich Lambert
Related topics
Seminal works
- skoog2017
- harris2020
Frequently asked questions
- تفاوت بین عبور و جذب چیست؟
- عبور کسری از نور فرودی است که از نمونه عبور میکند؛ جذب لگاریتم منفی عبور است و مستقیماً با غلظت متناسب است، به همین دلیل کارهای کمی از جذب استفاده میکنند.
- چرا در طیفسنجی فرابنفش-مرئی یک بلانک اندازهگیری میشود؟
- یک بلانک حاوی همه چیز به جز آنالیت، جذب و بازتاب توسط حلال، کووت و معرفها را تصحیح میکند، بنابراین جذب اندازهگیری شده فقط منعکسکننده آنالیت است.