Doku Fiksasyonu ve Gömme
Fiksasyon ve gömme, histolojinin ilk hazırlık adımlarıdır. Fiksasyon, dokuyu kimyasal olarak stabilize ederek bozulmasını durdurur ve yapısını korurken; gömme, sabitlenmiş dokuyu ince kesitler halinde kesilebilmesi için sağlam bir destekleyici ortamla çevreler. Bu iki işlem birlikte, nihai lamın canlı dokuyu ne kadar doğru yansıttığını belirlemektedir.
Tanım
Doku fiksasyonu, otoliz ve pütrefaksiyonu durduran ve doku yapısını stabilize eden kimyasal veya fiziksel bir işlemdir; gömme ise, ince kesitlerin alınabilmesi için sabitlenmiş, işlenmiş dokunun bir destekleyici ortam (parafin veya reçine gibi) ile daha sonra infiltre edilmesidir.
Kapsam
Bu konu, fiksasyonun amaçlarını ve başlıca kimyasal özelliklerini, doku işleme adımlarını (dehidrasyon, şeffaflaştırma, infiltrasyon) ve parafin veya reçineye gömmeyi kapsamaktadır. Metodolojik bir referans niteliğinde olup, klinik veya laboratuvar dozaj protokolleri içermemektedir.
Temel sorular
- Bir fiksatif, yapıyı korurken doku bozulmasını nasıl durdurur?
- Çapraz bağlayıcı ve koagülan fiksatifler etkileri açısından nasıl farklılık gösterir?
- Doku neden gömme işleminden önce dehidrate edilmeli, şeffaflaştırılmalı ve infiltre edilmelidir?
- Gömme ortamı, kesit kalınlığını ve sonraki analizleri nasıl kısıtlar?
Anahtar kavramlar
- Otoliz ve durdurulması
- Çapraz bağlayıcı (aldehit) fiksatifler
- Koagülan (alkol bazlı) fiksatifler
- Formalin fiksasyonu
- Dehidrasyon ve şeffaflaştırma
- Parafin gömme
- Reçine gömme
Mekanizmalar
Fiksatifler iki geniş mekanizmadan biriyle etki etmektedir. Formaldehit ve glutaraldehit gibi çapraz bağlayıcı fiksatifler, reaktif gruplar (başlıca proteinler üzerinde) arasında metilen veya daha uzun köprüler oluşturarak moleküler yapıyı sabitlemektedir; iki aldehit grubuna sahip glutaraldehit, daha kapsamlı çapraz bağlar oluşturur ve özellikle ince ultrastrüktürü iyi korur, bu nedenle elektron mikroskobik fiksasyonda merkezi bir rol oynamıştır (Sabatini, 1963). Etanol gibi koagülan fiksatifler ise bunun yerine proteinleri dehidrate ederek ve çökeltmek suretiyle etki etmektedir. Çapraz bağlama antijenleri maskeleyebileceğinden, immün elektron mikroskopisi için geliştirilen periodat-lizin-paraformaldehit formülasyonunda olduğu gibi, fiksatifler yapısal koruma ile korunmuş reaktiviteyi dengeleyecek şekilde tasarlanmıştır (McLean & Nakane, 1974). Fiksasyondan sonra doku, dereceli alkoller aracılığıyla dehidrate edilir, gömme ortamıyla karışabilen bir çözücüde şeffaflaştırılır ve erimiş parafin veya sıvı reçine ile infiltre edilir; bu maddeler sertleştiğinde mikrotomi için gerekli mekanik desteği sağlamaktadır.
Klinik önem
Fiksasyon ve gömme, tanısal patoloji ve araştırmalarda kullanılan doku bloklarının kalitesini ve moleküler korunmasını belirlemektedir. Bu madde, yöntemleri kavramsal olarak açıklamaktadır; preparatların nasıl yapıldığını tanımlar ve bireysel tanı veya tedavi kararları için bir temel oluşturmamaktadır.
Kanıt ve kılavuzlar
Fiksasyon ve işleme uygulamaları, Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques (Suvarna et al., 2018) ve Kiernan (2015) gibi standart histoteknoloji referanslarında pekiştirilmiştir. Pre-analitik fiksasyon değişkenleri (fiksatif tipi, fiksasyona kadar geçen süre, fiksasyon süresi), sonraki moleküler analizleri etkilediği kabul edilmekte ve ilgili immünohistokimya ve kalite değerlendirme konuları kapsamında laboratuvar kalite literatüründe ele alınmaktadır.
Tarihçe
Pratik fiksasyon kimyası on dokuzuncu yüzyıl boyunca gelişmiştir; formalin 1890'ların sonlarında bir doku fiksatif olarak tanıtılmış ve parafin gömme ince kesitler elde etme yolu olarak yerleşmiştir. Yirminci yüzyılda glutaraldehit fiksasyonu ultrastrüktürel koruma için karakterize edilmiş (Sabatini, 1963) ve antijeniteyi yapıyla birlikte korumak için özel fiksatifler formüle edilmiştir (McLean & Nakane, 1974).
Öne çıkan isimler
- David Sabatini
- Paul Nakane
İlgili konular
Temel eserler
- sabatini-1963
- mclean-1974
Sıkça sorulan sorular
- Formalin, rutin histoloji için neden en yaygın fiksatifdir?
- Tamponlanmış formaldehit, dokuya oldukça iyi nüfuz eder, yapıyı geniş ölçüde korumak için proteinleri çapraz bağlar, ucuzdur ve rutin boyama ile çoğu sonraki analizlerle uyumludur; bu özellikler onu standart genel amaçlı fiksatif haline getirmiştir.
- Doku neden parafin gömme işleminden önce dehidrate edilmeli ve şeffaflaştırılmalıdır?
- Parafin su ile karışmadığından, erimiş parafinin dokuya nüfuz edip onu destekleyebilmesi için dokunun suyu dereceli alkoller (dehidrasyon) aracılığıyla ve ardından parafinle karışabilen bir çözücü (şeffaflaştırma) ile değiştirilmelidir.