Fijación e Inclusión de Tejidos

La fijación y la inclusión son los primeros pasos preparatorios de la histología. La fijación estabiliza químicamente el tejido para detener su descomposición y mantener su estructura, mientras que la inclusión rodea el tejido fijado con un medio de soporte firme para que pueda cortarse en secciones delgadas. Juntos, determinan la fidelidad con la que la preparación final refleja el tejido vivo.

Definition

La fijación de tejidos es el tratamiento químico o físico que detiene la autólisis y la putrefacción y estabiliza la estructura del tejido; la inclusión es la infiltración subsiguiente del tejido fijado y procesado con un medio de soporte (como parafina o resina) para que se puedan cortar secciones delgadas.

Scope

Este tema cubre los propósitos y las principales químicas de la fijación, los pasos del procesamiento de tejidos (deshidratación, aclaramiento, infiltración) y la inclusión en parafina o resina. Es una referencia metodológica y no proporciona protocolos de dosificación clínica o de laboratorio.

Core questions

• ¿Cómo detiene un fijador la degradación del tejido mientras preserva su estructura?
• ¿En qué se diferencian los fijadores de entrecruzamiento y los coagulantes en sus efectos?
• ¿Por qué el tejido debe deshidratarse, aclararse e infiltrarse antes de la inclusión?
• ¿Cómo limita el medio de inclusión el grosor de la sección y el análisis posterior?

Key concepts

• Autólisis y su detención
• Fijadores de entrecruzamiento (aldehído)
• Fijadores coagulantes (a base de alcohol)
• Fijación con formalina
• Deshidratación y aclaramiento
• Inclusión en parafina
• Inclusión en resina

Mechanisms

Los fijadores actúan mediante uno de dos mecanismos generales. Los fijadores de entrecruzamiento, como el formaldehído y el glutaraldehído, forman puentes de metileno o más largos entre grupos reactivos (principalmente en proteínas), fijando la estructura molecular; el glutaraldehído, con dos grupos aldehído, entrecruza más extensamente y preserva especialmente bien la ultraestructura fina, razón por la cual se volvió central para la fijación en microscopía electrónica (Sabatini, 1963). Los fijadores coagulantes, como el etanol, actúan deshidratando y precipitando proteínas. Debido a que el entrecruzamiento puede enmascarar antígenos, se han diseñado fijadores para equilibrar la preservación estructural con la reactividad retenida, como en la formulación de periodato-lisina-paraformaldehído desarrollada para la inmunomicroscopía electrónica (McLean & Nakane, 1974). Después de la fijación, el tejido se deshidrata mediante alcoholes de concentración creciente, se aclara en un solvente miscible con el medio de inclusión y se infiltra con parafina fundida o resina líquida, que al endurecerse proporciona el soporte mecánico necesario para la microtomía.

Clinical relevance

La fijación y la inclusión determinan la calidad y la preservación molecular de los bloques de tejido utilizados en patología diagnóstica e investigación. Esta entrada explica los métodos conceptualmente; describe cómo se realizan las preparaciones y no es una base para decisiones individuales de diagnóstico o tratamiento.

Evidence & guidelines

La práctica de fijación y procesamiento se consolida en referencias estándar de histotecnología como Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques (Suvarna et al., 2018) y Kiernan (2015). Las variables de fijación preanalítica (tipo de fijador, tiempo hasta la fijación, duración) se reconocen como influyentes en los ensayos moleculares posteriores y se abordan en la literatura de calidad de laboratorio dentro de los temas relacionados de inmunohistoquímica y evaluación de la calidad.

History

La química de la fijación práctica se desarrolló a lo largo del siglo XIX, con la introducción de la formalina como fijador de tejidos a finales de la década de 1890 y el establecimiento de la inclusión en parafina como una vía para obtener secciones delgadas. En el siglo XX, la fijación con glutaraldehído se caracterizó por su preservación ultraestructural (Sabatini, 1963), y se formularon fijadores especializados para preservar la antigenicidad junto con la estructura (McLean & Nakane, 1974).

Key figures

• David Sabatini
• Paul Nakane

Seminal works

• sabatini-1963
• mclean-1974

Frequently asked questions

¿Por qué la formalina es el fijador más común para la histología de rutina?

El formaldehído tamponado penetra el tejido razonablemente bien, entrecruza las proteínas para preservar la estructura de manera general, es económico y es compatible con la tinción de rutina y la mayoría de los ensayos posteriores, lo que lo convirtió en el fijador estándar de propósito general.

¿Por qué el tejido debe deshidratarse y aclararse antes de la inclusión en parafina?

La parafina no es miscible con el agua, por lo que el agua del tejido se reemplaza mediante alcoholes de concentración creciente (deshidratación) y luego por un solvente miscible con la parafina (aclaramiento) antes de que la parafina fundida pueda infiltrar y soportar el tejido.