الكيمياء النسيجية المناعية والتألق المناعي

تستخدم الكيمياء النسيجية المناعية (IHC) والتألق المناعي الأجسام المضادة لتحديد مواقع جزيئات معينة داخل مقطع نسيجي. يرتبط الجسم المضاد بمستضده المستهدف في الموقع ثم يصبح مرئيًا — بواسطة إنزيم يرسب منتجًا ملونًا (الكيمياء النسيجية المناعية) أو بواسطة علامة فلورية تُرى تحت مجهر التألق (التألق المناعي) — مما يسمح بتحديد أنواع الخلايا والجزيئات التي لا تستطيع الصبغات الروتينية تمييزها.

Definition

الكيمياء النسيجية المناعية والتألق المناعي هما طريقتان تعتمدان على الأجسام المضادة لتحديد مواقع مستضدات معينة في المقاطع النسيجية عن طريق ربط الأجسام المضادة الموسومة بأهدافها والكشف عن الوسم المرتبط من خلال تفاعلات لونية إنزيمية (الكيمياء النسيجية المناعية) أو التألق (التألق المناعي).

Scope

يغطي هذا الموضوع مبدأ الوسم المعتمد على الأجسام المضادة، والكشف المباشر وغير المباشر، وأنظمة تضخيم الإشارة، واسترجاع المستضدات، والتحقق من صحة هذه المقايسات ومراقبة جودتها. إنه مرجع منهجي ولا يقدم تفسيرًا سريريًا أو إرشادات علاجية.

Core questions

• كيف يحقق الجسم المضاد تحديدًا نوعيًا للجزيئات في الأنسجة؟
• كيف تختلف مخططات الكشف المباشر وغير المباشر؟
• كيف تعمل أنظمة التضخيم واسترجاع المستضدات على تحسين الحساسية؟
• كيف يتم التحقق من صحة المقايسات المعتمدة على الأجسام المضادة والتحكم فيها للحصول على تفسير موثوق؟

Key concepts

• خصوصية ارتباط المستضد بالجسم المضاد
• الكشف المباشر مقابل الكشف غير المباشر
• تضخيم الإشارة (مثل أنظمة أفيدين-بيوتين، البوليمرات)
• الوسم اللوني مقابل الوسم الفلوري
• استرجاع المستضد (الحاتمة)
• الضوابط والتحقق من صحة المقايسة
• النوعية والتفاعل المتقاطع

Mechanisms

الحدث الأساسي هو الارتباط النوعي لجسم مضاد بمستضده داخل المقطع. في الطريقة المباشرة، يحمل الجسم المضاد الأولي نفسه الوسم؛ في الطريقة غير المباشرة، يتم الكشف عن جسم مضاد أولي غير موسوم بواسطة جسم مضاد ثانوي موسوم، مما يضخم الكشف ويوحده. أظهر كونس وزملاؤه لأول مرة أن جسمًا مضادًا موسومًا بمجموعة فلورية يمكنه تحديد موقع مستضده في الأنسجة (Coons, 1941)، مؤسسًا بذلك التألق المناعي. ثم سمح الكشف المعتمد على الإنزيم بإشارات لونية دائمة، وزادت الحساسية بواسطة أنظمة التضخيم مثل معقد أفيدين-بيوتين-بيروكسيداز (Hsu et al., 1981)، ولاحقًا، الكشف المعتمد على البوليمرات. نظرًا لأن تثبيت الألدهيد يمكن أن يحجب الحواتم من خلال الارتباط المتقاطع، غالبًا ما تُستخدم خطوات استرجاع المستضدات المعتمدة على الحرارة أو البروتياز لاستعادة ارتباط الجسم المضاد في الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمغمورة بالبارافين (Shi et al., 1991). يعتمد التفسير الموثوق به على الضوابط الإيجابية والسلبية المناسبة وعلى التحقق التحليلي الرسمي لكل مقايسة (Fitzgibbons et al., 2014).

Clinical relevance

يشكل الوسم المعتمد على الأجسام المضادة أساس جزء كبير من التشخيص والأبحاث الحديثة القائمة على الأنسجة من خلال تحديد السلالة الخلوية والعلامات الجزيئية المحددة. يصف هذا المدخل الأساليب ومتطلبات جودتها من الناحية المفاهيمية؛ وهو توجيه مرجعي وليس أساسًا لقرارات تشخيصية أو علاجية فردية.

Evidence & guidelines

صدرت إرشادات مهنية بشأن التحقق التحليلي من مقايسات الكيمياء النسيجية المناعية عن الكلية الأمريكية لأطباء الأمراض (Fitzgibbons et al., 2014)، وتم توحيد مبادئ الطريقة في المراجع القياسية لعلم الأنسجة (Suvarna et al., 2018). تستمد طرق استرجاع المستضدات والتضخيم من دراسات أولية تأسيسية (Shi et al., 1991; Hsu et al., 1981).

History

بدأ تحديد المواقع المعتمد على الأجسام المضادة بطريقة الأجسام المضادة الفلورية التي قدمها كونس وزملاؤه في عام 1941، والتي أتاحت الكشف النوعي للجزيئات في الأنسجة. لاحقًا، أعطت طرق الوسم بالإنزيم إشارات مرئية دائمة، وزادت أنظمة التضخيم مثل معقد أفيدين-بيوتين-بيروكسيداز (Hsu et al., 1981) الحساسية، ووسع استرجاع المستضدات المستحث بالحرارة (Shi et al., 1991) التلوين المناعي الموثوق به ليشمل المواد المثبتة بشكل روتيني والمغمورة بالبارافين. تبع ذلك توحيد المعايير وإرشادات التحقق مع تزايد أهمية هذه الطرق في الممارسة التشخيصية (Fitzgibbons et al., 2014).

Key figures

• Albert Coons
• Su-Ming Hsu
• Shan-Rong Shi

Seminal works

• coons-1941
• hsu-1981
• shi-1991

Frequently asked questions

ما الفرق بين الكيمياء النسيجية المناعية والتألق المناعي؟

كلاهما يستخدم الأجسام المضادة لتحديد مواقع المستضدات في الأنسجة؛ تصور الكيمياء النسيجية المناعية الجسم المضاد المرتبط من خلال إنزيم يرسب منتجًا ملونًا يُرى بالمجهر الضوئي، بينما يستخدم التألق المناعي وسمًا فلوريًا يُرى تحت مجهر التألق.

لماذا غالبًا ما يكون استرجاع المستضد ضروريًا؟

تثبيت الفورمالين يربط البروتينات بشكل متقاطع ويمكن أن يحجب الحواتم التي تتعرف عليها الأجسام المضادة؛ يمكن لخطوات استرجاع المستضدات المعتمدة على الحرارة أو الإنزيمات أن تكشف هذه الحواتم بحيث يصبح التلوين ممكنًا في الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمغمورة بالبارافين.