Fiksasi dan Penanaman Jaringan

Fiksasi dan penanaman adalah langkah-langkah persiapan pertama dalam histologi. Fiksasi menstabilkan jaringan secara kimiawi sehingga menghentikan pembusukan dan mempertahankan strukturnya, sementara penanaman mengelilingi jaringan yang telah difiksasi dalam medium pendukung yang kuat sehingga dapat dipotong menjadi bagian tipis. Bersama-sama, keduanya menentukan seberapa akurat sediaan akhir mencerminkan jaringan hidup.

Definition

Fiksasi jaringan adalah perlakuan kimiawi atau fisik yang menghentikan autolisis dan pembusukan serta menstabilkan struktur jaringan; penanaman adalah infiltrasi selanjutnya dari jaringan yang telah difiksasi dan diproses dengan medium pendukung (seperti parafin atau resin) sehingga bagian tipis dapat dipotong.

Scope

Topik ini mencakup tujuan dan kimia utama fiksasi, langkah-langkah pemrosesan jaringan (dehidrasi, penjernihan, infiltrasi), dan penanaman dalam parafin atau resin. Ini adalah referensi metodologis dan tidak memberikan protokol dosis klinis atau laboratorium.

Core questions

• Bagaimana fiksatif menghentikan degradasi jaringan sambil mempertahankan struktur?
• Bagaimana fiksatif pengikat silang dan koagulan berbeda dalam efeknya?
• Mengapa jaringan harus didehidrasi, dijernihkan, dan diinfiltrasi sebelum ditanam?
• Bagaimana medium penanaman membatasi ketebalan bagian dan analisis selanjutnya?

Key concepts

• Autolisis dan penghentiannya
• Fiksatif pengikat silang (aldehida)
• Fiksatif koagulan (berbasis alkohol)
• Fiksasi formalin
• Dehidrasi dan penjernihan
• Penanaman parafin
• Penanaman resin

Mechanisms

Fiksatif bekerja melalui salah satu dari dua mekanisme luas. Fiksatif pengikat silang (cross-linking) seperti formaldehida dan glutaraldehida membentuk jembatan metilen atau jembatan yang lebih panjang antara gugus reaktif (terutama pada protein), mengunci struktur molekuler pada tempatnya; glutaraldehida, dengan dua gugus aldehida, mengikat silang lebih ekstensif dan mempertahankan ultrastruktur halus dengan sangat baik, itulah sebabnya ia menjadi pusat fiksasi mikroskop elektron (Sabatini, 1963). Fiksatif koagulan seperti etanol bekerja dengan mendehidrasi dan mengendapkan protein. Karena pengikatan silang dapat menutupi antigen, fiksatif telah direkayasa untuk menyeimbangkan preservasi struktural dengan reaktivitas yang dipertahankan, seperti dalam formulasi periodat-lisin-paraformaldehida yang dikembangkan untuk imunoelektron mikroskopi (McLean & Nakane, 1974). Setelah fiksasi, jaringan didehidrasi melalui alkohol bertingkat, dijernihkan dalam pelarut yang dapat bercampur dengan medium penanaman, dan diinfiltrasi dengan parafin cair atau resin cair, yang setelah mengeras memberikan dukungan mekanis yang diperlukan untuk mikrotomi.

Clinical relevance

Fiksasi dan penanaman menentukan kualitas dan preservasi molekuler blok jaringan yang digunakan dalam patologi diagnostik dan penelitian. Entri ini menjelaskan metode secara konseptual; ini menjelaskan bagaimana sediaan dibuat dan bukan merupakan dasar untuk keputusan diagnostik atau pengobatan individual.

Evidence & guidelines

Praktik fiksasi dan pemrosesan dikonsolidasikan dalam referensi histoteknologi standar seperti Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques (Suvarna et al., 2018) dan Kiernan (2015). Variabel fiksasi pra-analitik (jenis fiksatif, waktu fiksasi, durasi) diakui memengaruhi uji molekuler selanjutnya dan dibahas dalam literatur kualitas laboratorium dalam topik imunohistokimia dan penilaian kualitas terkait.

History

Kimia fiksasi praktis berkembang sepanjang abad kesembilan belas, dengan formalin diperkenalkan sebagai fiksatif jaringan pada akhir tahun 1890-an dan penanaman parafin ditetapkan sebagai cara untuk mendapatkan bagian tipis. Pada abad kedua puluh, fiksasi glutaraldehida dikarakterisasi untuk preservasi ultrastruktural (Sabatini, 1963), dan fiksatif khusus diformulasikan untuk mempertahankan antigenisitas bersama dengan struktur (McLean & Nakane, 1974).

Key figures

• David Sabatini
• Paul Nakane

Seminal works

• sabatini-1963
• mclean-1974

Frequently asked questions

Mengapa formalin merupakan fiksatif yang paling umum digunakan untuk histologi rutin?

Formaldehida yang dibuffer menembus jaringan dengan cukup baik, mengikat silang protein untuk mempertahankan struktur secara luas, tidak mahal, dan kompatibel dengan pewarnaan rutin serta sebagian besar uji selanjutnya, yang menjadikannya fiksatif serbaguna standar.

Mengapa jaringan harus didehidrasi dan dijernihkan sebelum penanaman parafin?

Parafin tidak dapat bercampur dengan air, sehingga air jaringan diganti melalui alkohol bertingkat (dehidrasi) dan kemudian oleh pelarut yang dapat bercampur dengan parafin (penjernihan) sebelum parafin cair dapat menginfiltrasi dan menopang jaringan.